Описание

Инструкция по применению набора реагентов «Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Железо-глюкозо-лактозный агар, двухслойный)»

1.НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов «Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Железо-глюкозо-лактозный агар, двухслойный)» предназначен для идентификации энтеробактерий по их способности ферментировать глюкозу и лактозу, образовывать сероводород и расщеплять мочевину (при добавлении реактива к среде ex temporo).

2.ХАРАКТЕРИСТИКА

2.1.Принцип метода.

Принцип метода – визуальное обнаружение энтеробактерий, выросших на питательной среде при посеве исследуемых образцов.

2.2.Состав набора.

Набор реагентов представляет собой комплект из двух компонентов: № 1 для нижнего и № 2 для верхнего слоев среды, получаемый смешиванием сухих ингредиентов из расчета г/л:

Компонент №1 «Нижний слой» Компонент № 2 «Верхний слой»

Экстракт кормовых дрожжей 0,15 Экстракт кормовых дрожжей 0,35

Пептон сухой ферментативный Д(+)-лактоза 9,52

для бактериологических целей 3,0 Динатрия фосфат обезвоженный 3,22

Д-глюкоза 1,2 Соль Мора 0,56

Натрий серноватистокислый безводный 2,04 Феноловый красный

Динатрия фосфат обезвоженный 0,60 водорастворимый 0,056

Феноловый красный водорастворимый 0,02 Натрия додецилсульфат 0,042

Бриллиантовый зеленый 0,001 Агар микробиологический 6,30±0,1

Агар микробиологический 1,5±0,1

Набор реагентов «Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Железо-глюкозо-лактозный агар, двухслойный)» выпускается в виде комплекта из двух банок с каждым компонентом среды: компонент № 1 «Нижний слой» — по 160 г, компонент № 2 «Верхний слой» по 250 г в полиэтиленовых банках вместимостью 350 мл соответственно.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРСТИКИ НАБОРА.

3.1. Специфическая активность (чувствительность среды, скорость роста и дифференцирующие свойства).

При посеве в 3 пробирки со средой по одной бактериологической петле, диаметром 2 мм питательная среда должна обеспечивать рост каждого из тест-штаммов: Shigella flexneri 1а 8516, Escherichia coli 3912/41 (О55:К59), Proteus vulgaris НХ 19 222, Citrobacter freundii 58/57, Salmonella typhi Н-901 ГДР/ГИСК через 20-24 ч инкубации при температуре (37±1) °С c соответствующим проявлением тестов:

Штаммы	Ферментация глюкозы	Ферментация лактозы	Образование сероводорода	Расщепление мочевины
Shigella flexneri 1а 8516	+	—	—	—
Escherichia coli 3912/41 (О55:К59)	+Г	+	—	—
Salmonella typhi Н-901 ГДР/ГИСК	+	—	+	—
Citrobacter freundii 58/57	+Г	+	+	—
Proteus vulgaris НХ 19 222	Учет затруднителен (реакция маскируется)	Учет затруднителен (реакция маскируется)	+	+

Примечание.

1) Ферментация глюкозы:

+ (положительная реакция)– пожелтение столбика среды (для штамма Shigella flexneri 1а 8516 возможно пожелтение среды «по уколу»);

Г (газообразование) – разрывы (пузырьки) внутри столбика среды

2) Ферментация лактозы:

+ (положительная реакция) – пожелтение скошенной части среды;

— (отрицательная реакция) – отсутствие пожелтения скошенной части среды.

3) Образование сероводорода:

+ (положительная реакция) – почернение верхней части столбика среды;

— (отрицательная реакция) – отсутствие почернения среды

4) Расщепление мочевины:

+ (положительная реакция) – окрашивание в малиновый цвет всей или только скошенной части среды;

— (отрицательная реакция) – отсутствие малинового окрашивания среды.

4.МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Соблюдение «Правил устройства, техники безопасности производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения» (Москва, 1981 г.).

5.ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ

Термостат, обеспечивающий температуру (37±1) °С

Флаконы стеклянные
Пробирки стерильные
Пипетки стеклянные стерильные
Спиртовка
Вода дистиллированная
50% раствор мочевины

6.АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ПРОБЫ

Объекты исследований в санитарной и клинической микробиологии.

7.ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

7.1.Приготовление питательной среды.

Компонент №1 «Нижний слой». Компонент в количестве, указанном на этикетке, размешивают в 300 мл дистиллированной воды, кипятят 1-2 мин, охлаждают до температуры 48-52 °С, добавляют 2,4 мл 50 % раствора мочевины*, разливают по 2 мл стерильной пипеткой в стерильные пробирки и оставляют для застывания «столбиком».

Компонент №2 «Верхний слой». Компонент в количестве, указанном на этикетке, размешивают в 700 мл дистиллированной воды, кипятят 1-2 мин, охлаждают до температуры 48-52 °С, разливают стерильной пипеткой по 4,5 мл в стерильные пробирки поверх застывшего «нижнего слоя» и скашивают, оставив столбик высотой около 20 мм.

Готовая среда красного цвета. Готовая среда может быть использована в течение месяца при условии хранения при температуре 2-8 °С.

*Примечание

Приготовление 50 % раствора мочевины: 50 г мочевины

ТУ (6-09-2117) растворяют в 50 г дистиллированной

воды, выдерживают 2-3 сут при температуре 18-22°С для

самостерилизации. Готовый раствор можно хранить при

температуре 18-22 °С в течение месяца.

Для проверки стерильности обоих компонентов среды по 5 пробирок с отдельно разлитыми «нижним» и «верхним» слоями среды выдерживают при температуре (37±1) °С в течение 40-48 ч. (Наличия роста микроорганизмов и изменения цвета среды не должно быть).

7.2. Посев исследуемого материала проводить согласно «Методическим указаниям по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» (М,, 1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследований, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений»

8.РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Регистрацию результатов анализа проводят визуально, по наличию роста колоний.

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Учет результатов производят согласно «Методическим указаниям по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» (М,, 1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследований, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений»

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Набор реагентов «Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Железо-глюкозо-лактозный агар двухслойный)» необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом, защищенном от света месте при температуре от 2 до 25 ºС.

Транспортирование должно проводиться при температуре от 2 до 25 ºС всеми видами крытого транспорта.

Срок годности – 2 года со дня изготовления. Набор реагентов с истекшим сроком годности использованию не подлежит.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей Инструкции по применению.

Рекламации на качество набора реагентов в течение срока годности следует направлять в адрес производителя: ФГУП «НПО «Микроген»,115088, г. Москва, ул. 1-я Дубровская, 15, тел.(495) 710-37-87. Адрес производства: 367010, г. Махачкала, ул.А.Султана , 13 б тел. 8722 55 82 32.